PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Lombardi M.C., Turchetti A.P., Tinoco H.P., Pessanha A.T., Soave S.A., Malta M.C.C., Paixão T.A. & Santos R.L. 2014. Diagnosis of Leishmania infantum infection by Polymerase Chain Reaction in wild mammals. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(12):1241-1244. Departamento de Clínica e Cirurgia Veterinárias, Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Antônio Carlos 6627, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: rsantos@vet.ufmg.br Visceral leishmaniasis is a chronic infectious disease caused by Leishmania infantum (synonym: Leishmania chagasi) and transmitted by the sandfly Lutzomyia longipalpis in Brazil. It is an endemic zoonosis in several regions of the country, including Belo Horizonte (State of Minas Gerais). In urban areas, the domestic dog is susceptible and considered the most important animal reservoir. However, L. infantum has been previously diagnosed in other species, including captive primates and canids. This study aimed to evaluate the presence of the agent DNA in captive animals as well as some free ranging animals from the Zoo-Botanical Foundation of Belo Horizonte by Polymerase Chain Reaction. Eighty one blood samples from primates, carnivores, ruminants, edentates, marsupial, and a monogastric herbivore were analyzed. Three primates Alouatta guariba (brown howler monkey), and two canids Speothos venaticus (bush dog) were positive, demonstrating the importance of leishmaniasis control in endemic areas for preservation of wildlife species in captivity.

• Leishmaniasis Leishmania infantum leishmaniose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Lombardi M.C., Turchetti A.P., Tinoco H.P., Pessanha A.T., Soave S.A., Malta M.C.C., Paixão T.A. & Santos R.L. 2014. Diagnosis of Leishmania infantum infection by Polymerase Chain Reaction in wild mammals. [Diagnóstico de infecção por Leishmania infantum pela reação em cadeia da polimerase em mamíferos silvestres.] Pesquisa Veterinária Brasileira 34(12):1241-1244. Departamento de Clínica e Cirurgia Veterinárias, Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Antônio Carlos 6627, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: rsantos@vet.ufmg.br A leishmaniose visceral é uma doença infecciosa crônica de mamíferos causada, no Brasil, pelo protozoário Leishmania infantum (sinonímia: Leishmania chagasi) e transmitida pelo flebótomo Lutzomyia longipalpis. Trata-se de uma zoonose endêmica em muitas regiões do Brasil, inclusive em Belo Horizonte, Minas Gerais. Em centros urbanos, leishmaniose visceral acomete principalmente o cão doméstico. Entretanto, L. infantum já foi diagnosticada em outras espécies, incluindo canídeos e primatas de cativeiro em zoológicos. Este estudo buscou avaliar a presença do DNA deste agente em animais de cativeiro e de vida livre da Fundação Zoobotânica de Belo Horizonte através da reação em cadeia da polimerase. Foram analisadas oitenta e uma amostras de sangue oriundas de primatas, carnívoros, ruminantes, edentatos, marsupial e herbívoro de estômago simples. Três primatas Alouatta guariba (bugio marrom) e dois canídeos Speothos venaticus (cachorro-do-mato-vinagre), foram positivos, demonstrando a importância do controle da leishmaniose em áreas endêmicas com a finalidade de conservar a fauna silvestre mantida em cativeiro.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Ferreira P.R.B., Larangeira D.F., Oliveira L.S., Malta M.C.C., Gomes M.C., Bastos B.L., Portela R.W. & Barrouin-Melo S.M. 2013. [Indirect ELISA for the serological diagnosis of visceral leishmaniasis in wild canids.] Teste de ELISA indireto para diagnóstico sorológico de leishmaniose visceral em canídeos silvestres. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(4):528-534. Laboratório de Infectologia Veterinária, Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia, Av. Adhemar de Barros 500, Salvador, BA 40170-110, Brazil. E-mail: paulomev@yahoo.com.br In South America, some wild canids are considered natural reservoirs of Leishmania chagasi. The immunological response of wild canids to Leishmania is not well understood, and the development of diagnostic methods is necessary for such purpose. In the present study, the standardization of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the serodiagnosis of visceral leishmaniasis (VL) in Brazilian species of wild canids is described. Serum and plasma samples from 12 captive wild canids were studied: seven from maned wolves (Chrysocyon brachyurus), three from hoary foxes (Lycalopex vetulus), and two from crab-eating foxes (Cerdocyon thous). Samples from C. brachyurus and L. vetulus, both captive in an endemic area for VL, presenting clinical disease and positivity in Indirect Immunofluorescence Reaction and Polymerase Chain Reaction tests were used as positive controls. The antibody anti-dog IgG and Protein A, both conjugated with horseradish peroxidase, were compared in indirect ELISA tests which detected four (04/12) and three (03/12) seropositive C. brachyurus for anti-Leishmania antibodies, respectively. The ELISA tests were able to clearly distinguish negative from positive samples, as the mean optical density (OD) of the negative samples was 4.8 and 15.5 times lower than those of the positive ones either using anti-dog IgG and Protein A, respectively. Samples from three ELISA - positive C. brachyurus were analyzed by Western blotting and identified immunodominant bands of 19, 22, 24, 45 and 66 kDa, among 22 protein bands detected. The ELISAs with protein A and anti-dog IgG showed respectively excellent (Kappa = 1.0; p<0.001) and moderate (Kappa = 0.8; p<0.0015) agreement with the Western blotting assay. The ELISA tests showed to be adequate for screening studies to identify antibody responses, thus indicating contact with Leishmania infection by wild canids.

• Leishmania visceral leishmaniasis leishmaniose visceral

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Ferreira P.R.B., Larangeira D.F., Oliveira L.S., Malta M.C.C., Gomes M.C., Bastos B.L., Portela R.W. & Barrouin-Melo S.M. 2013. [Indirect ELISA for the serological diagnosis of visceral leishmaniasis in wild canids.] Teste de ELISA indireto para diagnóstico sorológico de leishmaniose visceral em canídeos silvestres. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(4):528-534. Laboratório de Infectologia Veterinária, Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia, Av. Adhemar de Barros 500, Salvador, BA 40170-110, Brazil. E-mail: paulomev@yahoo.com.br Na América do Sul, alguns canídeos silvestres são considerados reservatórios naturais da Leishmania chagasi. A resposta imunológica desses animais à Leishmania é pouco conhecida, havendo a necessidade de métodos diagnósticos adequados para esse fim. No presente estudo, é descrita a padronização do ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para o diagnóstico sorológico de leishmaniose visceral em canídeos silvestres brasileiros. Foram estudadas amostras de soro e plasma de 12 canídeos cativos: sete lobos-guará (Chrysocyon brachyurus), três raposinhas (Lycalopex vetulus) e dois cachorros-do-mato (Cerdocyon thous). As amostras de um C. brachyurus e uma L. vetulus, cativos em área endêmica para LV, que apresentavam doença clínica e positividade em testes de Imunofluorescência Indireta e Reação em Cadeia de Polimerase, foram utilizadas como controles positivos. Foram comparados os conjugados anti-IgG de cão e proteína A, ambos ligados a peroxidase, cujos testes detectaram quatro (04/12) e três (03/12) C. brachyurus soropositivos para anticorpos anti-Leishmania sp., respectivamente. As médias das densidades ópticas (DOs) das amostras negativas foram nitidamente mais baixas do que as médias das DOs dos positivos tanto no ELISA com anti-IgG de cão (4,8 vezes) como com proteína A (15,5 vezes). Os soros de três C. brachyurus positivos no ELISA indireto foram avaliados por Western blotting e identificaram 22 bandas, sendo imunodominantes as de peso molecular de 19, 22, 24, 45 e 66 kDa. Os testes ELISA com a proteína A e o conjugado anti-IgG de cão apresentaram respectivamente concordância excelente (Kappa = 1; p<0,001) e moderada (Kappa = 0,8; p<0,0015), com o Western blotting. Ambos foram, portanto, considerados adequados a avaliações de triagem de animais cuja resposta humoral de anticorpos indica contato com o parasito, úteis para subsidiar estudos para adequação de metodologias específicas para os canídeos silvestres.